一、参考标准
《SN/T 2206.3-2009 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 化妆品微生物检验方法 第3部分：肺炎克雷伯氏菌》。
二、生物学特征
革兰氏阴性杆菌，为较短粗的杆菌，大小0.5～0.8×1～2 um，单独、成双或短链状排列。无芽胞，无鞭毛，有较厚的荚膜，多数有菌毛。营养要求不高，在普通琼脂培养基上形成较大的灰白色粘液菌落，以接种环挑之，易拉成丝，有助鉴别。在肠道杆菌选择性培养基上能发酵乳糖，呈现有色菌落。
三、检验程序
图1 肺炎克雷伯氏菌检验程序
四、检验方法及结果
1、增菌
肺炎克雷伯氏菌在SCDLP液体培养基中36±1℃培养18-24h后生长浑浊。如图2所示。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
图2 SCDLP液体培养基培养结果
2、选择性分离
自SCDLP培养液中，取1-2接种环，划线接种于胆硫乳琼脂平板（DHL）上，置36±1℃ 培养18-24 h。
在DHL平板上肺炎克雷伯氏菌菌落呈淡粉红色，大而隆起，光滑湿润，粘液状，相邻菌落容易融合成脓汁样，接种针挑取菌落时呈丝状粘连。如图3所示。
图3 肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117在DHL平板上的培养结果
五、初步生化鉴定
从DHL平板上至少挑取5个典型或可疑菌落，如果平板上可疑菌落少于5个，则全部挑取，把挑取的可疑菌落分别穿刺于动力半固体琼脂，并接种到营养琼脂斜面培养基，36±１℃培养18-24 h。将营养琼脂斜面培养基上的纯培养物做革兰氏染色、氧化酶试验。
1、动力半固体琼脂
肺炎克雷伯氏菌在动力半固体培养基中无动力，延穿刺线生长。如图4所示，相比较大肠埃希氏菌在动力半固体培养基中有动力，呈扩散生长，培养基会出现浑浊现象。
a:大肠埃希氏菌ATCC 25922 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
图4 动力半固体培养基培养结果
2、革兰氏染色
肺炎克雷伯氏菌染色结果为红色，为革兰氏阴性菌。
图5
3、氧化酶试验
肺炎克雷伯氏菌氧化酶试验不变色，为阴性。如图6所示，相比较铜绿假单胞菌变蓝为阳性。
a:铜绿假单胞菌ATCC 9027 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
图6 氧化酶试验结果
六、后续生化鉴定
挑取无动力，革兰氏染色阴性，氧化酶试验阴性的菌进行后续生化鉴定。
1、尿素酶试验
划线接种于尿素酶生化管培养基中，培养基变为粉红色，为阳性。相比较鼠伤寒沙门氏菌不变色，为阴性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028
图7 尿素酶鉴定试验结果
2、靛基质生化鉴定试验
将菌接种于胰蛋白水培养基中，36±1℃培养24±2h。培养结束后，滴加Kovacs氏靛基质试剂2-4滴，立即观察现象。肺炎克雷伯氏菌为黄色环，为阴性。相比较大肠埃希氏菌为玫红色环，为阳性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大肠埃希氏菌ATCC25922
图8 靛基质鉴定试验结果
3、MR鉴定试验
用MR-VP培养基培养结束后，滴加甲基红试剂，立即观察现象，肺炎克雷伯氏菌显黄色，为阴性。相比较大肠埃希氏菌显红色，为阳性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大肠埃希氏菌ATCC25922
图9 MR鉴定试验结果
4、V-P鉴定试验
用MR-VP培养基培养结束后，滴加V-P试剂，继续培养0.5-4 h，观察现象。肺炎克雷伯氏菌变红，为阳性。相比较大肠埃希氏菌为黄色，为阴性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:大肠埃希氏菌ATCC25922
图10 V-P鉴定试验结果
5、西蒙氏枸橼酸盐利用试验
划线接种于西蒙氏枸橼酸盐培养基上，培养基变蓝，为阳性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117
图11 西蒙氏枸橼酸盐培养基培养结果
6、赖氨酸脱羧酶鉴定试验
接种于赖氨酸脱羧酶肉汤生化管中，用无菌液体石蜡覆盖培养基液面，培养18-24 h。观察现象，肺炎克雷伯氏菌培养基呈紫色，为阳性。相比较，福氏志贺氏菌培养基呈黄色，为阴性。
a:空白对照 b:肺炎克雷伯氏菌CMCC(B)46117 c:福氏志贺氏菌ATCC12022
图12 赖氨酸脱羧酶鉴定试验结果
注：肺炎克雷伯氏菌生化特性见下表。
注：本文属九鼎彩票平台生物原创，未经允许不得转载。
上一篇：食品中志贺氏菌检验简单介绍（上）
下一篇：单核增生李斯特氏菌的计数方法
